Получение и свойства кристаллического биливердина IXα: простые методы получения изомерно однородного биливердина и [14C]биливердина с использованием 2,3-дихлор-5,6-дицианбензохинона

Аморфный изомерно чистый биливердин IXα легко получают с выходом более 70% дегидрированием билирубина с помощью 2,3-дихлор-5,6-дицианбензохинона в диметилсульфоксиде при тщательно контролируемых условиях. Аналогичным способом можно получить кристаллический биливердин IXα и аморфный [14C]биливердин с выходом более 40%. Чистый кристаллический пигмент характеризовали методом элементного анализа, метилированием, химическим и ферментативным восстановлением до билирубина, методами инфракрасной, ультрафиолетовой и видимой абсорбционной спектроскопии, спектроскопией ядерного магнитного резонанса и масс-спектрометрией с полевой десорбцией; также была определена его растворимость. В определённых условиях дегидрирование приводило к образованию биливердина, загрязнённого изомерами IIIα и XIIIα вследствие диспропорционирования билирубина. Образование неизомерных форм IXα зависит от концентраций реагентов и порядка их смешивания и происходит в нейтральных анаэробных условиях. Вероятно, ответственны радикальные реакции, что позволяет предположить: первой стадией дегидрирования билирубина с помощью 2,3-дихлор-5,6-дицианбензохинона в диметилсульфоксиде является образование катион-радикала билирубина, а не отщепление гидрид-иона.