Четвёртый международный симпозиум по молекулярной энтомологии

Для передачи инфекции Plasmodium, возбудитель малярии, должен завершить сложную программу развития в организме комара-хозяина. Однако на молекулярном уровне взаимодействия комара и паразита изучены недостаточно. С использованием библиотек вычитания мы начали анализ генов комара и паразита, экспрессирующихся в ходе развития Plasmodium berghei в организме Anopheles stephensi. Библиотеки получали путём вычитания мРНК из кишечника неинфицированных комаров после кровососания и/или мРНК бесполых стадий Plasmodium из мРНК ookinetes P. berghei или кишечника инфицированных комаров. Были подготовлены библиотеки, обогащённые генами, преимущественно экспрессирующимися на четырёх стадиях развития: 1) ookinetes, культивируемые in vitro, 2) ранние ооцисты, 3) ооцисты средней стадии и 4) поздние ооцисты. Среди 2 182 секвенированных клонов было идентифицировано 1 657 уникальных последовательностей. Из них 1 032, предположительно, имели комариное происхождение (<55% AT), а 625 — происхождение Plasmodium (>55% AT). Анализ нескольких случайно выбранных генов методом нозерн-блоттинга показал их повышенную экспрессию в период развития, соответствующий происхождению библиотеки. Поликлональное антитело против предполагаемого поверхностного белка ookinete, содержащего адгезивный домен типа A фактора фон Виллебранда, ингибировало образование ооцист на 60–79%, что делает этот белок кандидатом в антиген, блокирующий передачу инфекции. Были выделены клоны, кодирующие три различных каспазы комара. Примечательно, что все три гена индуцировались в эпителии средней кишки во время инвазии паразита.