Высокоуровневая транзиентная продукция рекомбинантных антител и слитых белков на основе антител в клетках HEK293

ВВЕДЕНИЕ: В последние годы постоянно возрастает потребность в моноспецифичных реагентах с высокой аффинностью связывания, особенно в моноклональных антителах. Повышение пропускной способности получения антител обеспечивалось оптимизацией отбора in vitro с использованием фагового дисплея, что переместило основное узкое место на этапы продукции и очистки рекомбинантных антител в удобном для конечного пользователя формате. Одноцепочечные фрагменты антител scFv требуют дополнительных меток для детекции и во многих иммуноанализах менее пригодны, чем иммуноглобулин G (IgG). В отличие от них бивалентный формат антител scFv-Fc обладает многими свойствами IgG и совместим с широким спектром применений. РЕЗУЛЬТАТЫ: В данном исследовании была оптимизирована транзиентная экспрессия антител scFv-Fc в клетках эмбриональной почки человека (HEK) 293. В адгезивных клетках HEK293T были достигнуты уровни продукции антител scFv-Fc 10–20 мг/л. Использование суспензионных клеток HEK293-6E, экспрессирующих усечённый вариант ядерного антигена 1 вируса Эпштейна–Барр (EBV) (EBNA1), в сочетании с продукцией в бессывороточных условиях повысило объёмный выход до 10 раз — более чем до 140 мг/л антител scFv-Fc. После оптимизации вектора и процесса выход антител scFv-Fc и цитотоксичного слитого белка «антитело–РНКаза» дополнительно увеличился в 3–4 раза и превысил 450 мг/л. Наконец, был сконструирован полностью новый вектор экспрессии для млекопитающих, предназначенный для одноэтапного клонирования генов scFv из библиотек фагового дисплея антител в одной рамке считывания. Транзиентная экспрессия более 20 различных антител scFv-Fc обеспечила объёмный выход до 600 мг/л, при среднем значении 400 мг/л. ЗАКЛЮЧЕНИЕ: Транзиентная продукция рекомбинантных антител scFv-Fc в клетках HEK293-6E в сочетании с оптимизированными векторами и культивированием во встряхиваемых колбах по режиму fed-batch является эффективной и устойчивой и хорошо интегрируется в конвейер высокопроизводительного получения рекомбинантных антител.