Макропиноцитоз является основным путем, ответственным за трансфекцию ДНК в клетках CHO с помощью амфифила с обращением заряда

Описано клеточное поглощение липоплекса, образованного функциональным амфифилом с обращением заряда и ДНК. Сначала для блокирования различных путей эндоцитоза применяли фармакологические ингибиторы. Анализ полученной трансфекционной активности показал, что в клетках яичника китайского хомячка (CHO) путем, приводящим к трансфекции, является эндоцитоз. При ингибировании специфического пути макропиноцитоза экспрессия β-галактозидазы значительно снижалась (на 90%); ингибирование клатрин-опосредованного пути приводило лишь к 30%-ному снижению экспрессии, тогда как ингибирование кавеолин-опосредованного пути не оказывало влияния на экспрессию. Кроме того, исследование кинетики трансфекции показало, что клеточное поглощение, ответственное за экспрессию гена, происходит медленнее, чем клатрин-опосредованный эндоцитоз, что согласуется с поглощением веществ из жидкой фазы, а не с рецептор-опосредованным поглощением. Далее для визуализации путей поглощения ДНК-липоплекса было проведено исследование флуоресцентной колокалокализации. Наблюдалась колокализация ДНК-липоплекса с Cascade Blue — маркером поглощения из жидкой фазы. Также наблюдалась колокализация ДНК-липоплекса с трансферрином — маркером клатрин-опосредованного эндоцитоза. Однако колокализации с Lysotracker, маркером эндосом и лизосом, не обнаружено. Полученные результаты показывают, что для данного амфифила с обращением заряда именно макропиноцитоз, а не обычно наблюдаемый у катионных липидов клатрин-опосредованный эндоцитоз, является основным путем, приводящим к трансфекции генов в клетках CHO.