UMG Lenti: новые лентивирусные векторы для эффективной экспрессии трансгена и репортерного гена в ранних гемопоэтических клетках-предшественниках человека

Лентивирусные векторы широко используются для изучения биологических свойств регуляторных белков и/или онкогенов, ассоциированных с лейкозом, путем стабильной экспрессии этих генов в гемопоэтических стволовых клетках и клетках-предшественниках. В таких исследованиях критически важно иметь возможность отслеживать и/или сортировать инфицированные клетки, обычно с помощью флуоресцентных белков, кодируемых модифицированным вирусным геномом. Наиболее распространенная стратегия обеспечения коэкспрессии трансгена и репортерного гена заключается во вставке элемента IRES между соответствующими кДНК, что приводит к образованию бицистронных мРНК, транскрипция которых осуществляется с помощью одного промотора. Однако, хотя продукт гена, расположенного перед IRES, обычно экспрессируется в больших количествах, трансляция расположенной ниже кДНК, обычно кодирующей репортерный белок, часто бывает непостоянной, что затрудняет выявление и выделение трансдуцированных клеток. Для преодоления этих ограничений мы разработали новые лентивирусные векторы с двумя промоторами, получившие названия UMG-LV5 и UMG-LV6, в которых экспрессия трансгена регулируется мощным промотором UBC, а экспрессия репортерного белка EGFP — минимальным регуляторным элементом гена WASP. Эти векторы, содержащие два различных трансгена, были протестированы на различных линиях гемопоэтических клеток человека, а также на первичных клетках человека CD34+, в сравнении с вектором FUIGW, содержащим экспрессионную кассету UBC-трансген-IRES-EGFP. В этих экспериментах векторы UMG-LV5 и UMG-LV6 обеспечивали несколько более низкий уровень экспрессии трансгена по сравнению с FUIGW, но значительно более высокий уровень EGFP, что позволяло легко различать трансдуцированные и нетрансдуцированные клетки. Был также создан дополнительный конструкт, в котором кДНК, кодирующая репортерный белок, расположена перед последовательностью IRES, а трансген — после нее. Этот вектор, получивший название UMG-LV11, обеспечивал высокую экспрессию как продукта трансгена, так и EGFP во всех исследованных клетках. Таким образом, UMG-LV представляют собой полезные векторы для исследований на основе переноса генов в гемопоэтических стволовых клетках и клетках-предшественниках, а также в связанных с ними системах.