Первичная структура и характеристика предшественника полипептида, активирующего аденилатциклазу гипофиза человека

кДНК человека, кодирующие предшественник полипептида, активирующего аденилатциклазу гипофиза (PACAP), были клонированы из библиотек кДНК семенника и коры головного мозга человека. Секвенирование нуклеотидов показало, что кДНК из библиотеки семенника кодировала полный предшественник PACAP, тогда как кДНК из библиотеки мозга представляла только карбоксиконцевую половину предшественника. Предсказанный предшественник PACAP человека состоял из 176 аминокислотных остатков и обладал высокой степенью сходства с предшественником овцы (82%). Оба предшественника, человеческий и овечий, содержали PACAP и другой пептид длиной 29 аминокислот — родственный PACAP пептид (PRP). PACAP и PRP были фланкированы парами основных аминокислот, которые считаются важными для посттрансляционной процессинговой обработки. Предшественник PACAP сходен с предшественником вазоактивного кишечного пептида (VIP), содержащим VIP и пептид — амид гистидин-метионин/гистидин-изолейцин (PHM/PHI). По структуре PRP имел некоторое сходство с PHM/PHI, рилизинг-гормоном гормона роста (GRH) и PACAP. Анализ методом нозерн-блоттинга показал, что транскрипт размером 3,0 кб экспрессировался в гипоталамусе овцы. Также было определено тканевое распределение мРНК PACAP у крысы. Саузерн-блоттинг геномной ДНК человека выявил одиночные полосы при использовании шести рестриктаз, что указывает на наличие одной копии гена PACAP в гаплоидном геноме. кДНК, кодирующая предшественник PACAP человека, экспрессировалась в клетках COS-7 и клетках яичника китайского хомячка (CHO). Иммунореактивный PACAP секретировался в культуральную среду обеими трансфицированными клеточными линиями.