Внешняя мембрана Salmonella typhimurium: доступность головных групп фосфолипидов для фосфолипазы C и дексрана, активированного бромистым цианогеном, в наружной среде

Целые клетки Salmonella typhimurium обрабатывали фосфолипазой C Bacillus cereus или дексраном, активированным CNBr. Если головные группы фосфатидилэтаноламина экспонированы и доступны на наружной поверхности внешней мембраны этих клеток, ожидалось, что эти группы будут гидролизованы первым агентом и ковалентно связаны со вторым агентом. У штаммов, продуцирующих липополисахариды типов S или Rc, результаты не указывали на наличие каких-либо доступных головных групп на наружной поверхности. Напротив, у штаммов, которые образуют внешние мембраны с менее полными липополисахаридами (типы Rd или Re) и с уменьшенным содержанием белков, оба метода явно показали наличие экспонированных головных групп фосфатидилэтаноламина. Эти данные наиболее просто объяснить, предположив, что у штаммов S и Rc внешние мембраны либо содержат все молекулы фосфолипидов во внутреннем листке, либо имеют белки, полностью покрывающие головные группы на их наружной поверхности. В обоих моделях уменьшение количества белков внешней мембраны у мутантов Rd или Re приведет к мембранам с экспонированными головными группами фосфолипидов. Дексран, активированный CNBr, можно легко приготовить, и он реагирует с высокой эффективностью вблизи физиологических условий. Его дополнительное преимущество как непроникающего реагента для маркировки мембраны состоит в том, что мы можем быть довольно уверены в его непроницаемости из-за его размера, в отличие от большинства других реагентов, чья предполагаемая непроницаемость зависит только от наличия заряженных групп.