Созревание ооцитов свиньи in vitro в бессывороточных культуральных средах: оплодотворение и последующее развитие эмбрионов in vitro

В настоящем исследовании была предпринята попытка разработать систему созревания ооцитов свиньи in vitro (IVM) в среде, не содержащей белка (PF), и изучить последующее развитие эмбрионов после оплодотворения in vitro. В эксперименте 1 исследовали четыре среды для IVM: 1) контрольную — North Carolina State University (NCSU) 23 + 10% фолликулярной жидкости свиньи; 2) PF-NCSU — NCSU 23 + 0,1% поливинилового спирта (PVA) + 1% аминокислот; 3) PF-TCM — среду для культивирования тканей (TCM) 199 + PVA; и 4) PF-WM — бесковую среду Waymouth MB 752/1 (WM) + PVA. Ооциты культивировали в соответствующих средах, содержащих хорионический гонадотропин лошади (eCG) и хорионический гонадотропин человека (hCG) (по 10 МЕ/мл каждого), в течение 20–22 ч, а затем без гормональных добавок еще 20–22 ч. После культивирования определяли степень расширения клеток кумулюса и частоту созревания ядра. Некоторые ооциты инкубировали совместно с размороженными сперматозоидами в течение 5–6 ч в модифицированной трис-буферной среде, содержащей кофеин и бычий сывороточный альбумин (BSA). В эксперименте 2 ооциты созревали в контрольной среде, PF-TCM и PF-WM, затем их оплодотворяли in vitro и культивировали в течение 144 ч в среде NCSU 23 + BSA. В среде PF-NCSU до стадии метафазы II дошла меньшая доля ооцитов (p < 0,01), чем в других средах (45% против 80–85%). Наиболее выраженное расширение клеток кумулюса наблюдалось у ооцитов, созревавших в контрольной среде, затем у ооцитов в PF-TCM и PF-WM; в PF-NCSU расширение было очень слабым. Для ооцитов, созревавших в PF-NCSU, была получена более низкая частота проникновения сперматозоидов (p < 0,05), чем для ооцитов в контрольной среде (59% против 81%). В отличие от ооцитов, созревавших в контрольной среде (96%) и PF-TCM (93%), ооциты в PF-WM характеризовались более низкой частотой формирования мужского пронуклеуса (65%). По сравнению с контролем у ооцитов, созревавших в PF-WM, также наблюдалась значительно более низкая частота дробления (p < 0,05). Сходные доли эмбрионов достигли стадии бластоцисты при созревании ооцитов в контрольной среде (22%) и PF-TCM (13%). Эти результаты показывают, что ооциты свиньи могут успешно созревать в бесковой среде с последующим развитием до стадии бластоцисты.