pEPito: существенно усовершенствованный неviralный эписомный вектор экспрессии для клеток млекопитающих

ПРЕДПОСЫЛКИ: Эписомная репликация прототипного вектора pEPI-1 зависит от транскрипционной единицы, начинающейся с конститутивно экспрессируемого промотора немедленно-ранних генов цитомегаловируса (CMV-IEP) и направленной в последовательность участка прикрепления матрикса (MARS) длиной 2000 п. н., происходящую из гена человеческого бета-интерферона. Исходный вектор pEPI-1 содержит две транскрипционные единицы млекопитающих и в общей сложности 305 CpG-островков, расположенных преимущественно в элементах вектора, необходимых для бактериального размножения и, как известно, препятствующих устойчивой длительной экспрессии трансгена. РЕЗУЛЬТАТЫ: В настоящей работе сообщается о разработке нового вектора pEPito, производного от плазмидного репликона pEPI-1, но обладающего значительно повышенной эффективностью как in vitro, так и in vivo. Размер вектора pEPito существенно уменьшен; он содержит только одну транскрипционную единицу и на 60% меньше CpG-мотивов по сравнению с pEPI-1. По сравнению с исходной плазмидой pEPI-1 он обладает существенными преимуществами, включая более высокие уровни экспрессии трансгена и повышенную эффективность образования колоний in vitro, а также более устойчивые профили экспрессии трансгена in vivo. Эффективность векторов на основе pEPito была дополнительно повышена путем замены CMV-IEP элементом, включающим энхансер человеческого CMV и промотор человеческого фактора элонгации 1 альфа (hCMV/EF1P), который, как известно, в меньшей степени подвержен эпигенетическому сайленсингу. ВЫВОДЫ: Новый вектор pEPito можно считать усовершенствованным вектором, подходящим для биотехнологических применений in vitro и невирусной доставки генов in vivo.