Усиление экспрессии фактора стимулирования колоний гранулоцитов в Pichia pastoris путем слияния с альбумином сыворотки человека

Технология белковых фьюжн-конструкций стала важной стратегией повышения уровня экспрессии и периода полувыведения терапевтических белков в гетерологичных системах экспрессии. Фактор стимулирования колоний гранулоцитов (G-CSF) — это гемопоэтический фактор роста, клинически применяемый для лечения нейтропении. Повышенная экспрессия и стабильность G-CSF были достигнуты в Pichia pastoris путем конструирования белкового фьюжн с альбумином сыворотки человека (HSA). Стратегия включала амплификацию фрагментов, соответствующих кодон-оптимизированному G-CSF и домену 3 HSA, с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Перекрывающаяся ПЦР была использована для получения полноразмерного слитого гена (1 184 п.н.) с 15-п.н. линкерной последовательностью, состоящей из четырех глицинов и одной серина. Внеклеточная экспрессия осуществлялась ниже сигнала секреции α-фактора под контролем промотора алкогольоксидазы 1 с использованием вектора pPICZαB. У трансформантов наблюдались уровни секретируемого белка в диапазоне 110–380 мг·L−1. В одном из трансформантов (35), сверхэкспрессирующем фьюжн-белок, исследовали влияние аэрации и температуры; уровни G-CSF увеличивались в 1,8- и 2,3- раза соответственно. Оценка биологической активности показала, что фьюжн-белок сохраняет сопоставимую активность стимулирования клеточной пролиферации с коммерческим препаратом G-CSF.