Очищение, характеристика и молекулярный анализ гена, кодирующего глюкозилтрансферазу Streptococcus oralis

Streptococcus oralis является представителем семейства оральных стрептококков и микроорганизмом, колонизирующим ротовую полость человека на ранних этапах. S. oralis продуцирует глюкозилтрансферазу (GTase), которая синтезирует глюканы из сахарозы. Фермент был хроматографически очищен из культурального супернатанта S. oralis ATCC 10557. Очищенный фермент, GTase-R, имел молекулярную массу 173 кДа и изоэлектрическую точку (pI) 6,3. Этот фермент в основном синтезировал водорастворимые глюканы без зависимости от праймера. Добавление GTase заметно усиливало сахарозозависимую адгезию покоящихся клеток Streptococcus mutans на уровне, сопоставимом с таковым в растущих клетках S. mutans. Антитело против GTase-R ингибировало глюкансинтезирующую активность Streptococcus gordonii и Streptococcus sanguis, а также S. oralis. N-концевая аминокислотная последовательность GTase-R не проявляла сходства с известными последовательностями GTase оральных стрептококков. С использованием деградированных праймеров для ПЦР был клонирован и секвенирован фрагмент ДНК размером 8,1 кб, содержащий ген (gtfR), кодирующий GTase-R, и его регуляторный ген (rgg). Сравнение предполагаемых аминокислотных последовательностей показало тесное сходство генов rgg у S. oralis и S. gordonii. Было установлено, что ген gtfR содержит видоспецифическую нуклеотидную последовательность, соответствующую N-концевым 130 аминокислотным остаткам. Вставка erm или aphA в гены rgg или gtfR привела к снижению активности GTase у организма и изменению морфологии колоний этих трансформантов. Эти результаты указывают, что GTase S. oralis может играть важную роль в последующей колонизации мутанс-стрептококками.