Безопасный и удобный псевдовирусный ингибиционный тест для выявления нейтрализующих антител и скрининга ингибиторов проникновения вируса против нового коронавируса человека MERS-CoV

Появление нового коронавируса человека — коронавируса ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV), вызывающего заболевание, сходное с тяжелым острым респираторным синдромом (SARS), — подтверждается рядом данных. В связи с этим разработка эффективных вакцин и средств терапии остается клиническим приоритетом. Для этого необходимо оценивать нейтрализующие антитела и проводить скрининг ингибиторов проникновения MERS-CoV. В настоящем исследовании был получен псевдовирус, несущий полноразмерный шиповидный белок (S) MERS-CoV, на основе дефектного по Env, экспрессирующего люциферазу генома HIV-1. Затем был разработан псевдовирусный ингибиционный тест для выявления нейтрализующих антител и ингибиторов проникновения MERS-CoV. Результаты показали, что полученный псевдовирус MERS-CoV обеспечивает однократный цикл инфицирования различных клеток, экспрессирующих дипептидилпептидазу-4 (DPP4) — подтвержденный рецептор MERS-CoV. В соответствии с результатами ингибиционного теста на основе живого MERS-CoV, антисыворотка мышей, иммунизированных рекомбинантным белком, содержащим рецептор-связывающий домен (RBD; остатки 377–662) S-белка MERS-CoV, слитый с Fc-фрагментом человеческого IgG, продемонстрировала нейтрализующий антительный ответ против инфицирования псевдовирусом MERS-CoV. Кроме того, небольшая молекула — ингибитор проникновения HIV, направленный против gp41 (ADS-J1), — и модифицированный 3-гидроксифталевым ангидридом человеческий сывороточный альбумин (HP-HSA) значительно подавляли инфекцию псевдовирусом MERS-CoV. Таким образом, разработанный ингибиционный тест для MERS-CoV представляет собой безопасную и удобную псевдовирусную альтернативу ограничениям, связанным с работой с живым вирусом в условиях уровня биологической безопасности 3 (BSL-3), и может использоваться для быстрого скрининга ингибиторов проникновения MERS-CoV, а также для оценки индуцированных вакцинацией нейтрализующих антител против высокопатогенного MERS-CoV.