Современный алгоритм микробиологической диагностики антибиотико-ассоциированной диареи и псевдомембранозного колита, вызванных Clostridioides difficile

Введение. В настоящее время проблема ассоциированной с Clostridioides difficile инфекции (C. difficile-ассоциированная инфекция, C. difficile-AI) чаще всего проявляется двумя клиническими формами — антибиотико-ассоциированной диареей (AAD) и псевдомембранозным колитом (PMC), которые являются частыми побочными эффектами антибиотиков и варьируют от легкого до тяжелого течения. По данным авторов, AAD регистрируется у 3.2–29.0% пациентов, а риск развития PMC у оперированных пациентов составляет от 14 до 27%. Вопрос выявления и лечения C. difficile-AI особенно актуален в связи с возрастанием частоты регистрации AAD и PMC у пациентов с коронавирусной инфекцией (COVID-19), получавших большие дозы антибиотиков и блокаторы цитокинового шторма в ходе лечения. В современной зарубежной литературе AAD и PMC описываются как «нозокомиальный колит». Особую озабоченность вызывает категория пациентов — бессимптомные носители C. difficile, которые становятся эпидемиологически опасной группой, поддерживающей циркуляцию возбудителя в стационарах. Актуальность C. difficile-AI требует поиска эффективных методов и мероприятий лабораторной диагностики AAD и PMC, направленных на выявление и изучение биологических свойств возбудителей этих заболеваний. Материалы и методы. Для достижения поставленной цели проведен поиск литературы в англоязычной базе данных PubMed с использованием ключевых слов «C. difficile-associated infection», «antibiotic-associated diarrhea», «pseudomembranous colitis». Результаты и обсуждение. Основой алгоритмов исследования при диагностике C. difficile-AI является обнаружение фермента глутаматдегидрогеназы (GDH) с определением наличия экзотоксинов или генов, кодирующих GDH, TcdA, TcdB и бинарный токсин, а также бактериологическое исследование материала для выделения чистых культур возбудителя и изучения их биологических свойств. Американские и европейские общества микробиологов рекомендуют двухэтапный алгоритм, включающий скрининговый тест на выявление GDH в фекалиях и определение экзотоксинов (TcdA, TcdB) серологическими методами, такими как иммуноферментный анализ (ELISA) и иммунохроматографический анализ. При положительном результате ELISA или иммунохроматографического теста проводят бактериологическое исследование материала с последующим изучением токсигенных свойств и чувствительности выделенных штаммов C. difficile к антибиотикам. Наиболее оптимальным является трехэтапный алгоритм лабораторной диагностики C. difficile-AI, предусматривающий определение генов, кодирующих GDH, токсины A/B и бинарный токсин C. difficile. Отрицательный результат ПЦР позволяет прекратить дальнейший поиск возбудителя в образце, тогда как положительный результат (первый этап) требует бактериологического исследования образцов для выделения чистой культуры возбудителя (второй этап) и изучения ее чувствительности к антибиотикам (третий этап). Для повышения специфичности метода ПЦР предложен двухэтапный протокол с использованием праймеров к 16S-региону рРНК C. difficile, что позволило идентифицировать более 150 риботипов и 24 токсинотипа C. difficile. В качестве альтернативы ПЦР-риботипированию предложен метод масс-спектрометрии MALDI-TOF (matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry) для изучения эпидемических вспышек, профилирования бактерий и идентификации чистых культур C. difficile. MALDI-TOF и ПЦР-риботипирование могут быть использованы для мониторинга распространения возбудителя и проведения противоэпидемических мероприятий. Выводы. 1. В условиях неконтролируемого применения антибиотиков в лечебно-профилактических учреждениях заболеваемость C. difficile-AI имеет устойчивую тенденцию к росту. 2. Соблюдение определенного алгоритма диагностики C. difficile-AI необходимо для своевременного выявления AAD и PMC и предотвращения развития тяжелых форм. 3. Последовательная реализация этапов диагностики AAD и PMC предотвращает распространение нозокомиальных штаммов клостридий в стационаре.