Высвобождение и активность связанной β-амилазы в прорастающем зерне ячменя

В покоящихся зернах ячменя сорта Triumph (Hordeum vulgare L. cv. Triumph) около 40% β-амилазы можно было экстрагировать солевым раствором, тогда как оставшиеся 60% находились в связанной форме. В процессе роста проростка при 20 °C связанная форма высвобождалась главным образом между 1-м и 3-м сутками. При инкубации препарата, содержащего связанную β-амилазу, с экстрактом, приготовленным из эндоспермов, отделенных от прорастающих зерен, происходило высвобождение связанной β-амилазы, которое можно было изучать in vitro. Высвобождение почти полностью предотвращалось лепептином и антипейном — специфическими ингибиторами группы тиоловых (SH-) протеиназ, — но не подавлялось пепстатином A или ЭДТА, ингибирующими некоторые другие протеиназы ячменя. Таким образом, весьма вероятно, что в целом зерне по меньшей мере основная часть связанной β-амилазы высвобождается в результате протеолитического действия одной или нескольких тиоловых протеиназ. При высвобождении связанной β-амилазы папаином ее молекулярная масса была примерно на 5000 дальтон меньше, чем у β-амилазы, высвобожденной дитиотреитолом. Это указывает на то, что высвобождение обусловлено удалением участка самой β-амилазы. Аналогичное уменьшение размера происходило в процессе роста проростка. Связанная β-амилаза проявляла некоторую активность в отношении нативного крахмала и гидролизовала мальтотетраозу со скоростью, составлявшей примерно 70% от скорости, наблюдавшейся для такого же количества связанной β-амилазы после ее высвобождения. Следовательно, связанная β-амилаза не является неактивной, а более низкая скорость гидролиза, вероятно, обусловлена стерическими препятствиями, мешающими субстратам достигать активного центра.