Соображения по применению цифровой ПЦР в качестве точного инструмента молекулярной диагностики

ПРЕДПОСЫЛКИ: Цифровая полимеразная цепная реакция (dPCR) становится все более популярной разновидностью ПЦР и обладает рядом уникальных преимуществ в доклинических исследованиях, особенно при выявлении редких мутаций и точном количественном определении нуклеиновых кислот. Как и в случае многих новых исследовательских методов, применение dPCR в потенциальных клинических сценариях также описывается все чаще. СОДЕРЖАНИЕ: В данном обзоре рассматриваются некоторые факторы, которые необходимо учитывать при применении dPCR. По сравнению с количественной ПЦР в реальном времени (qPCR) dPCR явно обладает потенциалом обеспечивать более чувствительные и значительно более воспроизводимые клинические методы, пригодные для диагностических, прогностических и предиктивных тестов. Однако для реализации этого потенциала потребуется дальнейшее развитие технологии с целью снижения стоимости и упрощения ее применения. Одновременно результаты доклинических исследований необходимо будет представлять с исчерпывающим учетом связанных с ними ошибок. Для dPCR характерна значительно более предсказуемая дисперсия, чем для qPCR, однако этот метод также подвержен ошибкам на предшествующих этапах, связанным с такими факторами, как отбор образцов и экстракция. Кроме того, dPCR может страдать от систематического смещения, особенно приводящего к занижению результатов; внутренние положительные контроли, вероятно, столь же важны для dPCR, как и для qPCR, особенно при сообщении об отсутствии определенной последовательности. РЕЗЮМЕ: В данном обзоре освещаются некоторые аспекты, которые необходимо учитывать при применении dPCR, и обсуждаются источники ошибок. Рассмотренные факторы призваны содействовать внедрению dPCR в диагностические, предиктивные или прогностические приложения.