Яичник и овуляция: созревание in vitro, оплодотворение и развитие эмбрионов из незрелых ооцитов ранних преантральных фолликулов неполовозрелых мышей в упрощённой системе культивирования

Была разработана упрощённая система культивирования для созревания in vitro ранних преантральных фолликулов яичника мыши. Фолликулы культивировали по одному в каплях объёмом 20 микролитров под слоем масла в среде, дополненной рекомбинантным фолликулостимулирующим гормоном (р-ФСГ), при температуре 37 градусов C и в атмосфере воздуха с 5% CO2. Фолликулы росли и прикреплялись ко дну чашки, постепенно утрачивали сферическую структуру вследствие разрастания клеток гранулёзы через базальную мембрану и формировали фолликулы с полостями, подобными антральным. Нормальная трёхмерная структура фолликула утрачивалась, однако все его компоненты — теки, клетки гранулёзы и ооцит — сохраняли функциональность, что подтверждалось характерными профилями секреции эстрадиола, ингибина и прогестерона. Выживаемость фолликулов превышала 80%, а гистологический анализ подтвердил отсутствие атрезии и гибели клеток гранулёзы до 16-го дня. Диаметр ооцитов, составлявший 55 (+/-4) микрометра в день изоляции, к 16-му дню культивирования достигал 74 (+/-3) микрометра. Был исследован оптимальный момент для индукции окончательного мейотического созревания с помощью хорионического гонадотропина человека; наибольшее абсолютное число ооцитов на стадии метафазы II было получено на 12-й и 14-й дни (39% и 41% соответственно). Оплодотворяющий потенциал ооцитов, созревших in vitro, был сопоставим с таковым у контрольных ооцитов, созревших in vivo. Доля развития до стадии вылупившихся бластоцист составила 50%.