Очистка регуляторного компонента аденилатциклазы

Регуляторный компонент (G/F) аденилатциклазы [АТФ-пирофосфат-лиаза (циклизующая), EC 4.6.1.1] из плазматических мембран печени кролика был очищен практически до гомогенного состояния. Очистку проводили с использованием трех хроматографических процедур в растворах, содержащих дезоксихолат натрия, с последующими тремя стадиями в растворах, содержащих Lubrol. Удельная активность G/F в мембранных экстрактах увеличилась в 2 000 раз и достигла 3–4 мкмоль × мин−1 × мг−1 (активность реконституированной аденилатциклазы). Очищенный G/F восстанавливал стимулируемую гуаниновыми нуклеотидами, фторидом и гормонами активность аденилатциклазы в дефектном по аденилатциклазе варианте клеток лимфомы мыши S49. G/F также восстанавливал гормональную стимуляцию фермента в разобщенном варианте S49. Препараты чистого G/F содержали три полипептида с приблизительной молекулярной массой 52 000, 45 000 и 35 000. Активный белок G/F представлял собой мультисубъединичный комплекс, состоящий из этих полипептидов. Обработка G/F с помощью [32P]NAD+ и холерного токсина приводила к ковалентному мечению 32P полипептидов с молекулярной массой 52 000 и 45 000.