Количественное определение мРНК с использованием полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в режиме реального времени (ОТ-ПЦР): тенденции и проблемы

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени (ОТ-ПЦР) на основе флуоресценции широко используется для количественного определения стационарных уровней мРНК и является важным инструментом фундаментальных исследований, молекулярной медицины и биотехнологии. Такие анализы просты в выполнении, пригодны для высокопроизводительного формата и позволяют сочетать высокую чувствительность с надежной специфичностью. Технология быстро развивается благодаря внедрению новых ферментов, химических составов и приборного оборудования. Однако, хотя ОТ-ПЦР в режиме реального времени устраняет многие трудности, присущие обычной ОТ-ПЦР, становится все очевиднее, что она порождает новые проблемы, требующие безотлагательного внимания. Поэтому данный обзор не только представляет современное состояние ОТ-ПЦР в режиме реального времени, но и ставит дополнительную цель — критически описать и обсудить некоторые проблемы, связанные с интерпретацией результатов, выраженных в числовой форме и допускающих статистический анализ, но точность которых существенно зависит от вариабельности реагентов и действий оператора.