Двадцать пять лет количественной ПЦР для анализа экспрессии генов

После своего изобретения 25 лет назад ПЦР была адаптирована для многочисленных приложений молекулярной биологии. Анализ экспрессии генов с помощью обратной транскрипции и количественной ПЦР (RT-qPCR) стал ключевой технологией постгеномной эры. Со времени основания журнала BioTechniques он являлся источником информации об улучшениях технологии qPCR, экспериментального дизайна и анализа данных. qPCR, и более конкретно реального времени qPCR, стала рутинным и надежным подходом для измерения экспрессии целевых генов, валидации экспериментов на микрочипах и мониторинга биомаркеров. Применение реального времени qPCR практически вытеснило другие методы (например, Northern blot, RNase protection assays). В этом обзоре рассматривается текущее состояние qPCR для анализа экспрессии генов теперь, когда метод достиг зрелой стадии разработки и внедрения. Конкретно обсуждаются различные технологии флуоресцентных репортеров для реальной-time qPCR, а также выбор эндогенных контрольных генов. Также представлена концептуальная основа методов анализа данных с целью демистификации этих методик. Будущее qPCR по-прежнему перспективно: технология становится быстрее, экономичнее, проще в использовании и способна обеспечивать более высокий пропускной потенциал.