Высокопроизводительная система капельной цифровой ПЦР для абсолютного количественного определения числа копий ДНК
High-Throughput Droplet Digital PCR System for Absolute Quantitation of DNA Copy Number
2011-10-28
SCID: 54.1/kda25f4h
Discuss with AI
абсолютное количественное определение ДНКвнеклеточная ДНК плодавариация числа копийкапельная цифровая ПЦРобнаружение редких аллелей
Figures from the paper
Abstract (AI)
Цифровая ПЦР позволяет проводить абсолютное количественное определение нуклеиновых кислот в образце. Отсутствие масштабируемых и практичных технологий реализации цифровой ПЦР препятствовало широкому внедрению этой изначально мощной методики. Здесь мы описываем высокопроизводительную систему капельной цифровой ПЦР (ddPCR), обеспечивающую проведение приблизительно 2 миллионов реакций ПЦР с использованием стандартных анализов TaqMan в формате рабочего процесса с 96-луночным планшетом. Три области применения демонстрируют, что массивное разделение на фракции, обеспечиваемое нашей системой ddPCR, дает на порядки более высокие точность и чувствительность по сравнению с ПЦР в реальном времени. Во-первых, мы показываем возможность точного измерения вариаций числа копий в зародышевой линии. Во-вторых, для редких аллелей мы демонстрируем чувствительное выявление мутантной ДНК на фоне 100 000-кратного избытка ДНК дикого типа. В-третьих, мы демонстрируем абсолютное количественное определение циркулирующей ДНК плода и матери в бесклеточной плазме. Мы предполагаем, что эта система ddPCR позволит исследователям изучать сложные генетические ландшафты, выявлять и валидировать новые ассоциации с заболеваниями, а также открыть новую эру молекулярной диагностики.
Key Findings
1
Высокопроизводительная система капельной цифровой ПЦР обрабатывает примерно 2 миллиона ПЦР-реакций с использованием стандартных анализов TaqMan в формате 96-луночного планшета.
2
Масштабное разделение образцов обеспечивает на порядки более высокую точность и чувствительность по сравнению с ПЦР в реальном времени.
3
Платформа обеспечивает абсолютную количественную оценку циркулирующей внеклеточной ДНК плода и матери в плазме.
4
Система позволяет точно измерять вариации числа копий герминативной ДНК.
5
Система выявляет редкие мутантные аллели на фоне 100 000-кратного избытка ДНК дикого типа.
Research Object
Высокопроизводительная система капельной цифровой ПЦР (ddPCR) и анализируемые с её помощью образцы ДНК, включая герминативную ДНК, редкую мутантную ДНК, а также циркулирующую фетальную и материнскую ДНК
Research Subject
Абсолютное количественное определение числа копий ДНК, а также точность и чувствительность системы при измерении вариаций числа копий, обнаружении редких мутантных аллелей и количественном определении внеклеточной фетальной и материнской ДНК
Publication Details
Publication Date
2011-10-28
Journal
Publisher
ISSN
Open access PDF
Access Type
Author Information
Download PDF
Subscribe to digest