Протеиназа из прорастающего ячменя

Протеиназу очищали из проросшего ячменя (зелёного солода из Hordeum vulgare L. cv. Morex) посредством кислотной экстракции, фракционирования сульфатом аммония и последовательной хроматографии на колонках с КМ-целлюлозой, гемоглобин-сефарозой, Sephadex G-75 и органортутной агарозой. Степень очистки и конечный выход составили соответственно 290-кратное и 7,5%. Очищенный фермент был гомогенным при аналитическом гель-электрофорезе: обнаруживался единственный белок, связанный с протеазной активностью. Кажущуюся молекулярную массу нативного фермента, около 20 килодальтон, оценивали методом гель-фильтрации. Электрофорез в SDS-геле выявил единственный полипептид с молекулярной массой около 30 килодальтон. Оптимум pH гидролиза гемоглобина составлял приблизительно 3,8. Фермент сильно ингибировался лейпептином, но был нечувствителен к фенилметилсульфонилфториду, что указывает на его принадлежность к цистеиновым протеиназам. Он гидролизовал несколько высокомолекулярных белков различного происхождения. Способность фермента расщеплять запасные белки ячменя in vitro исследовали с помощью электрофореза в SDS-геле. Полученные картины гидролиза показали, что фермент быстро расщеплял крупные полипептиды гордеина с образованием относительно небольших фрагментов. Результаты исследования позволяют предположить, что этот фермент с молекулярной массой 30 килодальтон является одной из преобладающих цистеиновых протеиназ, секретируемых в крахмалистый эндосперм при прорастании ячменя, и играет важную роль в мобилизации запасных белков.