Различия в N-гликозилировании рекомбинантного человеческого фактора VII свертывания крови, полученного из клеток BHK, CHO и HEK293

Обоснование и методы: Рекомбинантный фактор VII (rFVII), являющийся предшественником рекомбинантного активированного фактора VII (rFVIIa), получают в клетках млекопитающих, поскольку для его формирования необходимы сложные посттрансляционные модификации. Для оценки пригодности клеточной линии человека для получения rFVII с посттрансляционными модификациями, максимально сходными с модификациями плазменного фактора VII (pdFVII), биохимические свойства rFVII, синтезированного в клетках эмбриональной почки человека HEK293 (HEK293rFVII), сравнивали со свойствами rFVII, экспрессированного в клетках яичника китайского хомячка (CHO; CHOrFVII) и клетках почки детеныша хомячка (BHK; BHKrFVII), а также со свойствами pdFVII с использованием различных аналитических методов. После стабильной трансфекции rFVII очищали из отобранных продукционных клонов, полученных из клеток BHK, CHO и HEK293, а выделенные препараты rFVII анализировали на активность белка, наличие примесей и посттрансляционные модификации. Результаты и обсуждение: Аналитические результаты не выявили выраженных различий между исследованными белками FVII, за исключением характера N-связанного гликозилирования. Большинство N-гликанов, обнаруженных в rFVII, полученном в клетках HEK293, не выявлялось в rFVII из клеток CHO и BHK или, что несколько неожиданно, в pdFVII; все остальные характеристики белка были сходными. Для гликанов HEK293rFVII были главным образом характерны более высокое структурное разнообразие, меньшая степень терминального сиалилирования и высокое содержание терминальных N-ацетилгалактозаминов (GalNAc). Все олигосахариды HEK293rFVII содержали один или несколько остатков фукозы (Fuc), а также гибридные и высокоманнозные структуры (Man). Выводы: Среди всех исследованных препаратов rFVII CHOrFVII характеризовался наиболее высокой степенью сиалилирования и отсутствием терминального GalNAc; поэтому клетки CHO были признаны наилучшим вариантом для получения rFVII.