Глубокий интронный вариант AIRE, нарушающий сплайсинг, вызывает синдром APECED посредством включения псдоэкзона, на которое можно воздействовать антисмысловым олигонуклеотидом

Аутоиммунная полиэндокринопатия — кандидоз — эктодермальная дистрофия (APECED) представляет собой угрожающее жизни моногенное аутоиммунное заболевание, преимущественно вызываемое биаллельными патогенными вариантами в гене регулятора аутоиммунитета (AIRE). Мы проспективно обследовали 104 пациента с клинически диагностированным синдромом APECED и выявили 17 пациентов (16%) из 14 родословных, у которых отсутствовали биаллельные варианты AIRE в экзонах или прилегающих интронных областях; 15 пациентов имели пуэрториканское происхождение. С помощью полногеномного секвенирования мы выявили глубокий интронный вариант AIRE (c.1504-818 G>A), который совместно наследовался с заболеванием у всех 17 пациентов. Мы разработали систему культивирования первичных дендритных клеток, полученных из моноцитов пациентов и экспрессирующих AIRE, и продемонстрировали, что вариант c.1504-818 G>A создает криптический сайт сплайсинга и активирует включение сдвигающей рамку считывания псевдоэкзонной последовательности длиной 109 пар оснований. Мы также обнаружили низкий уровень экспрессии AIRE в лимфобластоидных клеточных линиях (LCL), полученных от пациентов, и подтвердили включение псевдоэкзона в независимых экстратиимусных клеточных линиях, экспрессирующих AIRE. С помощью моделирования белка и транскриптомного анализа клеток эмбриональной почки человека 293 и эпителиальных клеток тимуса 4D6, трансфицированных AIRE, мы показали, что этот вариант изменяет карбоксильный конец белка AIRE, лишая его функциональности. Наконец, мы разработали антисмысловой олигонуклеотид (ASO), который устранял включение псевдоэкзона и восстанавливал нормальную последовательность транскрипта AIRE в LCL. Таким образом, наши результаты выявили вариант c.1504-818 G>A как основательский вариант AIRE, вызывающий APECED в пуэрториканской популяции, и показали, что включение псевдоэкзона представляет собой генетический механизм развития APECED, обратимый с помощью ASO.