Метод анализа содержания клеточной ДНК в парафинизированном патологическом материале с использованием проточной цитометрии

Разработан метод измерения содержания клеточной ДНК в парафинизированных образцах опухолей человека с помощью проточной цитометрии. Из тканевых блоков на микротоме получали толстые срезы толщиной 30 мкм и депарафинировали их в ксилоле. Затем срезы регидратировали путем последовательного погружения в 100-, 95-, 70- и 50%-ный этанол, после чего промывали дистиллированной водой. Одноклеточные суспензии получали инкубацией в 0,5%-ном пепсине при pH 1,5 и температуре 37 °C в течение 30 мин. Клетки подсчитывали, отмывали и окрашивали 4′,6-диамидино-2-фенилиндолом в концентрации 1 мкг/мл в течение 30 мин; содержание ДНК измеряли с использованием проточного цитометра ICP 22. Гистограммы ДНК, полученные этим методом, хорошо коррелировали с гистограммами, полученными для нефиксированной ткани той же опухоли, окрашенной этидием бромидом и митрамицином. Метод позволяет проводить ретроспективное исследование архивного материала, для которого уже известен клинический исход, и поэтому должен быть особенно полезен для определения прогностической значимости аномального содержания ДНК, измеряемого методом проточной цитометрии.