Количественный анализ влияния интронов на экспрессию генов млекопитающих

У высших эукариот версии одного и того же гена, содержащие интрон или лишённые интрона, могут характеризоваться резко различающимися профилями экспрессии. Интроны и сам процесс их удаления сплайсосомой могут влиять на экспрессию генов на многих уровнях, включая транскрипцию, полиаденилирование, экспорт мРНК, эффективность трансляции и скорость деградации мРНК. Однако степень вклада каждого из этих этапов в общий эффект любого отдельного интрона на экспрессию гена не была строго изучена. В данной работе описаны создание и первичная характеристика репортёрной системы на основе люциферазы для мониторинга влияния отдельных интронов и их положения в гене на экспрессию белка в клетках млекопитающих. Количественный анализ конструкций, содержащих интрон 6 гена человека TPI, в двух различных положениях внутри открытой рамки считывания люциферазы Renilla показал, что этот интрон действует преимущественно за счёт усиления накопления мРНК. Сплайсированные мРНК также характеризовались более высокой эффективностью трансляции, чем транскрипты без интронов. Однако распределение мРНК между ядром и цитоплазмой и стабильность мРНК в значительной степени не изменялись. Эти результаты были подтверждены для двух других интронов в минигене TCR-beta.