Анализ эпитопов аутоантител к инсулину с использованием рекомбинантного Fab

Аутоантитела к инсулину часто являются первыми аутоантителами, выявляемыми у маленьких детей с сахарным диабетом 1 типа, и могут присутствовать до появления клинических признаков диабета. Эти аутоантитела и их эпитопы, однако, недостаточно хорошо охарактеризованы. Мы исследовали использование моноклональных антител и их рекомбинантных Fab-фрагментов в качестве реактивов для анализа эпитопов. В данном исследовании мы клонировали и охарактеризовали рекомбинантный Fab моноклональной антитела, специфичной к инсулину, CG7C7. Мы обнаружили, что эпитоп этой антитела расположен преимущественно в петле A-цепи молекулы инсулина. Рекомбинантный Fab затем использовали в соревновательных экспериментах за связывание инсулина с аутоантителами к инсулину, присутствующими в сыворотках пациентов с диабетом 1 типа или 1.5 типа. В соревновательных экспериментах с сыворотками, положительными по аутоантителам к инсулину, рекомбинантный Fab значительно уменьшал связывание с [125I]-инсулином сывороток пациентов с диабетом 1 типа (n = 35) и диабетом 1.5 типа [латентный аутоиммунный диабет взрослых (LADA)] (n = 14) (P < 0.0001). Мы приходим к выводу, что конкуренция между инсулин-специфическими моноклональными антителами или их рекомбинантными Fab-фрагментами и аутоантителами к инсулину должна оказаться полезной для анализа эпитопов аутоантител к инсулину.