Длинная некодирующая РНК PVT1 способствует устойчивости рака поджелудочной железы к гемцитабину посредством активации пути Wnt/β-катенина и аутофагии через регуляцию осей miR-619-5p/Pygo2 и miR-619-5p/ATG14

ВВЕДЕНИЕ: Рак поджелудочной железы является одним из наиболее летальных злокачественных новообразований и характеризуется крайне неблагоприятными диагностикой и прогнозом. Развитие устойчивости к гемцитабину по-прежнему остается серьезной проблемой. Сообщалось, что длинная некодирующая РНК PVT1 участвует в канцерогенезе и химиорезистентности; однако механизм, посредством которого PVT1 регулирует чувствительность рака поджелудочной железы к гемцитабину, остается недостаточно изученным. МЕТОДЫ: Жизнеспособность клеток рака поджелудочной железы оценивали с помощью МТТ-теста in vitro и анализа формирования ксенотрансплантатных опухолей in vivo. Уровни экспрессии PVT1 и miR-619-5p определяли методом количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (qRT-PCR). Для оценки уровней белка и мРНК Pygo2 и ATG14 соответственно выполняли вестерн-блоттинг и qRT-PCR. Аутофагию исследовали путем определения аутофагического потока с помощью конфокальной микроскопии и изучения аутофагических вакуолей методом трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ). Функциональную роль и механизм действия PVT1 дополнительно изучали in vitro с помощью экспериментов по усилению и подавлению функции. РЕЗУЛЬТАТЫ: В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что PVT1 экспрессировалась на повышенном уровне в клеточных линиях рака поджелудочной железы, устойчивых к гемцитабину. Эксперименты по усилению и подавлению функции показали, что PVT1 снижала чувствительность к гемцитабину in vitro и in vivo. Далее было установлено, что PVT1 повышала экспрессию Pygo2 и ATG14 и тем самым регулировала сигнальный путь Wnt/β-катенина и аутофагическую активность, преодолевая устойчивость к гемцитабину посредством связывания miR-619-5p. Кроме того, в промоторной области PVT1 были обнаружены три элемента связывания TCF/LEF (TBE), а активация сигнального пути Wnt/β-катенина, опосредованная повышением экспрессии Pygo2, увеличивала экспрессию PVT1 за счет прямого связывания с областью TBE. Более того, было выявлено, что PVT1 взаимодействует с ATG14, способствуя сборке специфичного для аутофагии комплекса I (PtdIns3K-C1) и ATG14-зависимой активности PtdIns3K III класса. ВЫВОДЫ: Эти данные указывают на то, что PVT1 играет критическую р...