Детергентно-трипсиновый метод подготовки ядер для проточно-цитометрического анализа ДНК

Описана новая модификация разработанного нами детергентного метода подготовки ядер для проточно-цитометрического анализа ДНК. В исходном методе проблемой было получение низких коэффициентов вариации пиков и количественного окрашивания ядер из различных тканей. В новой модификации это было достигнуто путем трипсинизации нефисксированных ядер. Ядра стабилизировали спермином. В метод была включена простая процедура длительного хранения образцов при −80 °C. Флуоресценция ядер оставалась стабильной в течение не менее 3 часов после окрашивания. Защита образцов от света была обязательной. Хранение и окрашивание не вызывали потери клеток. Метод успешно применяли к следующим образцам: (a) нормальные ткани — лимфоциты, гранулоциты и селезенка человека; лимфоциты, костный мозг, селезенка, печень, почка и тимус мыши; (b) неоплазии человека — рак легкого, рак молочной железы, лимфома, лейкоз, рак мочевого пузыря и рак полости рта; (c) опухоли человека у бестимусных мышей — рак молочной железы, рак легкого, меланома и рак толстой кишки; (d) асцитные опухоли мыши — JB-1, L 1210, опухоли Эрлиха и P 383. Таким образом, метод, по-видимому, хорошо подходит для рутинного клинического применения.