Методы генетических манипуляций с Burkholderia gladioli патовара cocovenenans

ВВЕДЕНИЕ: Burkholderia gladioli патовар cocovenenans (BGC) является причиной спорадических вспышек пищевых отравлений с высокой заболеваемостью и смертностью в странах Азии. Регуляция продукции факторов вирулентности и токсинов у BGC изучена недостаточно, а исследования этой бактерии были затруднены отсутствием генетических инструментов. РЕЗУЛЬТАТЫ: Определение профиля чувствительности к антибиотикам показало, что штамм BGC ATCC33664 чувствителен к ряду антибиотиков, включая аминогликозиды, карбапенемы, фторхинолоны, тетрациклины и триметоприм. В данном исследовании установлено, что гентамицин, канамицин и триметоприм являются подходящими маркерами селекции для использования с BGC. При применении 10-минутного метода подготовки электрокомпетентных клеток бактерия эффективно трансформировалась методом электропорации репликативными плазмидами, содержащими начало репликации, происходящее из pRO1600. Число копий этих плазмид в BGC превышало 100. При совместной конъюгации с плазмидой-помощником, экспрессирующей транспозазу, векторы mini-Tn7 встраивались в геном BGC в единственный сайт вставки, ассоциированный с glmS, с определёнными сайтом и ориентацией. Наконец, транспозон Himar1 был использован для случайного транспозонного мутагенеза BGC. ВЫВОДЫ: Серия генетических инструментов, ранее разработанных для других грамотрицательных бактерий, была адаптирована для использования с BGC. Эти инструменты облегчают генетические исследования данного патогена и позволяют установить пути биосинтеза токсинов и их генетическую регуляцию.