Передача сигнала от рецепторов человеческого гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора и интерлейкина-3 включает тирозиновое фосфорилирование общего набора цитоплазматических белков

Человеческий гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF) и интерлейкин-3 (IL-3) оказывают многочисленные эффекты на пролиферацию, дифференцировку и функции клеток миелоидного ряда посредством взаимодействия со специфическими рецепторами на поверхности клеток. Биологические эффекты этих двух факторов роста в значительной степени перекрываются, однако о механизмах пострецепторной передачи сигнала известно немного. Мы исследовали влияние GM-CSF и IL-3 на активность протеинтирозинкиназы в линии человеческих клеток MO7E, пролиферирующих в ответ на действие любого из этих факторов. Активность тирозинкиназы выявляли методом иммуноблоттинга с использованием моноклонального антитела (MoAb), специфичного к фосфотирозину. Было установлено, что GM-CSF и IL-3 индуцируют почти идентичную картину тирозинового фосфорилирования белков при электрофорезе в одномерном и двумерном гелях. Особенно выраженно, более чем в 10 раз, усиливалось тирозиновое фосфорилирование двух цитозольных белков: белка с молекулярной массой 93 кДа (pp93) и белка с молекулярной массой 70 кДа (pp70). Тирозиновое фосфорилирование pp93 и pp70 выявлялось уже через 1 минуту, достигало максимума через 5–15 минут и затем постепенно снижалось. В ответ на действие обоих факторов — GM-CSF и IL-3 — также происходило тирозиновое фосфорилирование белков с молекулярной массой 150, 125, 63, 55, 42 и 36 кДа, хотя и в меньшей степени. Тирозиновое фосфорилирование зависело от концентрации GM-CSF в диапазоне 0,1–10 нг/мл и IL-3 в диапазоне 1–30 нг/мл. Стимуляция клеток MO7E 12-O-тетрадеканоилфорбол-13-ацетатом (TPA) или такими цитокинами, как гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), макрофагальный колониестимулирующий фактор (M-CSF), интерлейкин-1 (IL-1), интерлейкин-4 (IL-4), интерлейкин-6 (IL-6), интерферон-гамма, фактор некроза опухоли (TNF) или трансформирующий фактор роста бета (TGF-бета), не вызывала тирозинового фосфорилирования pp93 или pp70, что позволяет предположить, что эти два фосфопротеина специфичны для активации, индуцированной GM-CSF или IL-3. Степень и продолжительность фосфорилирования всех субстратов увеличивались после предварительной обработки клеток wi...