Регуляция функции канонических каналов переходного рецепторного потенциала (TRPC) диацилглицеролом и протеинкиназой C

Механизм индуцируемой рецепторами активации повсеместно экспрессируемого семейства канонических каналов переходного рецепторного потенциала (TRPC) млекопитающих являлся предметом интенсивных исследований. Каналы, преимущественно отвечающие на сигналы от рецепторов, сопряжённых с фосфолипазой C (PLC), как сообщается, получают модулирующее воздействие от диацилглицерола, рецепторов инозитол-1,4,5-трисфосфата эндоплазматического ретикулума и запасов Ca2+. Анализ каналов TRPC5, трансфицированных в B-клетки DT40, и соответствующих делеционных мутантов выявил эффективную активацию в ответ на активацию PLC-бета или PLC-гамма, не зависящую от рецепторов инозитол-1,4,5-трисфосфата или содержания внутриклеточных запасов. В клетках HEK293 и DT40 ответы каналов TRPC5 и TRPC3 на активацию PLC были весьма сходными, однако только каналы TRPC3, но не TRPC5, реагировали на добавление проникающего аналога диацилглицерола (DAG) 1-олеоил-2-ацетил-sn-глицерола (OAG). Вместе с тем добавление OAG или повышение уровня эндогенного DAG, обусловленное ингибированием либо DAG-липазы, либо DAG-киназы, полностью предотвращало активацию TRPC5 или TRPC4. Это ингибирующее действие DAG на каналы TRPC5 и TRPC4 явно опосредовалось протеинкиназой C (PKC), в отличие от стимулирующего действия DAG на TRPC3, для которого установлена независимость от PKC. Активация PKC полностью блокировала активацию каналов TRPC3 в ответ на OAG, а после блокирования PKC активация восстанавливалась. Ингибирование PKC приводило к снижению деактивации каналов TRPC3. Вход Ca2+, управляемый истощением запасов, в ответ на активацию рецепторов, сопряжённых с PLC, существенно снижался под действием OAG или ингибирования DAG-липазы зависимым от PKC образом. Однако вход Ca2+, управляемый истощением запасов, в ответ на блокатор насоса тапсигаргин не зависел от PKC. Результаты показывают, что каждый подтип TRPC сильно ингибируется вызванной DAG активацией PKC, что отражает, вероятно, универсальный механизм обратной связи, регулирующий TRPC, тогда как опосредованная DAG и независимая от PKC активация каналов TRPC характеризуется высокой подтиповой специфичностью. Profo...