Характеристика роли Cripto в клетках трофобласта в процессе развития плаценты

Cripto, член семейства белков Epidermal Growth Factor-Cripto/FRL-1/Cryptic (EGF-CFC1), играет ключевую роль в эмбриональном развитии. Помимо экспрессии в эмбриональных тканях, Cripto экспрессируется во внеэмбриональных тканях, включая различные субтипы клеток трофобласта, такие как губчатый трофобласт и гигантские синусоидальные клетки лабиринтного слоя. Согласно исследованиям человека, нарушение регуляции экспрессии Cripto отрицательно влияет на развитие и функцию плаценты. В предыдущих исследованиях было показано, что экспрессия Cripto значительно выше при таких патологиях плаценты, как placenta accreta и предлежание плаценты, чем в нормальных плацентах. Кроме того, анализ экспрессии генов семейства EGF-CFC1 выявил генетические ассоциации с рецидивирующей потерей беременности. В ходе эмбрионального развития мыши гомозиготная делеция Cripto во внутренней клеточной массе приводит к эмбриональной гибели между 7,5-м и 10,5-м днями; однако делеция Cripto во внеэмбриональной трофэктодерме ранее не изучалась. Таким образом, учитывая экспрессию Cripto в трофэктодерме и нарушение ее регуляции при осложнениях беременности, мы предположили, что Cripto играет важную роль в развитии и функционировании плаценты. Для проверки этой гипотезы мы создали нокаут Cripto исключительно в клетках трофэктодермы (TE) мыши с использованием рекомбинантного белка Tat-Cre. Протокол оптимизации Tat-Cre, включавший скрещивание самок с флокированным геном Cripto с гомозиготными самцами mTmG, продемонстрировал высокую эффективность Cre-опосредованной рекомбинации исключительно в клетках TE. После оптимизации модели нокаута Cripto гомозиготные эмбрионы с флокированным геном Cripto, обработанные Tat-Cre, переносили в матки псевдобеременных контрольных мышей для дальнейшего развития. При вскрытии имплантационных участков на 10,5-й день у нокаутов были выявлены значительно меньшие размеры имплантационных участков и меньшая толщина плаценты по сравнению с контрольными участками. Кроме того, окрашивание гематоксилином и эозином выявило отклонение положения плацент вдоль оси AM–M у нокаутов по сравнению с контролями...