Функция кумулюсных клеток в процессе созревания ооцитов крупного рогатого скота, оплодотворения и развития эмбрионов in vitro

Несколько современных методов микроманипуляции, таких как микроинъекция сперматозоидов, перенос ядер и перенос генов путем инъекции в пронуклеус, требуют удаления кумулюсных клеток из ооцитов или зигот на различных стадиях. У человека кумулюсные клетки часто удаляют после 15–18 ч совместной инкубации сперматозоидов и ооцитов, чтобы облегчить определение факта оплодотворения. Целью настоящего исследования была оценка функции кумулюсных клеток в процессе созревания ооцитов, оплодотворения и развития in vitro у крупного рогатого скота. Кумулюсные клетки удаляли до и после созревания, а также через 0, 7, 20 и 48 ч после оплодотворения. Ооциты или эмбрионы, лишенные кумулюсных клеток, культивировали либо отдельно, либо на монослое кумулюсных клеток, подготовленном в день начала культуры созревания. Доли созревших ооцитов, оплодотворенных ооцитов и эмбрионов, развившихся до стадий дробления, морулы и бластоцисты, а также до стадий расширенной или вылупившейся бластоцисты, регистрировали для статистического анализа с использованием процедур моделирования категориальных данных (CATMOD). Удаление кумулюсных клеток до созревания значительно снижало частоту созревания ооцитов (4–26% против 93–96%), оплодотворения (0–9% против 91–92%) и развития in vitro на всех оцененных стадиях. Удаление кумулюсных клеток непосредственно перед оплодотворением in vitro (IVF) или через 7 ч после IVF снижало частоту оплодотворения (58–60% и 71% соответственно против 91–92% в контроле), развития до стадии дробления (40–47% и 53–54% против 74–78% в контроле) и развития до стадий морулы и бластоцисты (15% и 24% против 45%; P < 0,05). Совместное культивирование с кумулюсными клетками, начатое на различных стадиях, не влияло на оплодотворение и развитие до стадии дробления, но значительно повышало частоту развития эмбрионов до стадий морулы или бластоцисты (P < 0,05).