Усовершенствованная система трансформации для молекулярно-биологических исследований плодов персика

Генетическая инженерия растений с использованием трансформации, опосредованной Agrobacterium, или бомбардировки частицами позволила целенаправленно вводить желательные признаки у многих сельскохозяйственных культур. Традиционные подходы к временной трансформации, несмотря на быстрое получение экспрессии генов, по своей природе являются кратковременными и недостаточны для длительных функциональных исследований. В данной работе разработана усовершенствованная система трансформации плодов персика, опосредованная Agrobacterium tumefaciens (штамм LBA4404), предусматривающая проведение трех последовательных заражений на трех стадиях развития: при завязывании плодов, в середине периода роста и за 2 недели до уборки урожая. По сравнению с традиционной временной трансформацией, выполняемой однократно на одной стадии и обычно обеспечивающей экспрессию генов лишь в течение примерно одной недели, предложенный протокол обеспечивает более длительный и выраженный трансформационный эффект, включая стабильную сверхэкспрессию PpSNARE13 и эффективный направленный мутагенез PpVOZ1 и PpVOZ2, сохраняющийся до 32 дней. Эта стратегия повторной трансформации существенно расширяет период эффективной экспрессии и позволяет избежать длительных процедур отбора, необходимых для стабильной трансформации. Она обеспечивает эффективный и надежный скрининг функций генов непосредственно в плодах персика, предлагая практический инструмент для исследований послеуборочной биологии и функциональной геномики древесных растений. Система может широко применяться для изучения функций генов в плодах персика и обладает значительным потенциалом для повышения качества продукции после уборки урожая и улучшения сохранности плодов.