Разработка pVCR94ΔX из Vibrio cholerae — прототипа для изучения конъюгативных плазмид IncA/C с множественной лекарственной устойчивостью

За последние несколько десятилетий устойчивость к антибиотикам у Vibrio cholerae неуклонно возрастала и стала серьезной угрозой в странах, затронутых холерой. Множественная лекарственная устойчивость (МЛУ) распространяется среди клинических и природных штаммов V. cholerae посредством латерального переноса генов, часто опосредованного интегративными и конъюгативными элементами (ICE) семейства SXT/R391. Однако в нескольких описанных, но, по-видимому, изолированных случаях было показано, что МЛУ у V. cholerae связана с другими генетическими элементами, способными к самостоятельной передаче, такими как конъюгативные плазмиды. Конъюгативные плазмиды IncA/C часто ассоциированы с МЛУ у изолятов Enterobacteriaceae. На сегодняшний день плазмиды IncA/C редко обнаруживались у V. cholerae или других видов рода Vibrio. В настоящей работе представлен подробный анализ pVCR94ΔX, производного плазмиды pVCR94 — новой конъюгативной плазмиды IncA/C, выявленной в клиническом штамме V. cholerae, выделенном во время вспышки холеры в Руанде в 1994 году. Было установлено, что pVCR94 обеспечивает устойчивость к сульфаметоксазолу, триметоприму, ампициллину, стрептомицину, тетрациклину и хлорамфениколу и передается с очень высокой частотой. Анализ последовательности выявил ее мозаичную природу, а также высокое сходство основных генов, ответственных за передачу и поддержание, с генами других плазмид IncA/C и ICE семейства SXT/R391. Хотя плазмиды IncA/C считаются серьезной угрозой для контроля устойчивости к антибиотикам, их базовой биологии уделялось мало внимания, главным образом из-за трудностей генетического манипулирования этими элементами, обусловливающими множественную лекарственную устойчивость. Поэтому нами было получено удобное производное pVCR94 — pVCR94ΔX, представляющее собой конъюгативную плазмиду размером 120,5 кб, кодирующую только устойчивость к сульфаметоксазолу. С помощью pVCR94ΔX мы идентифицировали начало передачи (oriT) и обнаружили ген, необходимый для передачи; оба элемента расположены в общей структурной основе плазмиды, что позволило обновить аннотацию всех плазмид IncA/C. pVCR94ΔX может служить полезной моделью для получения новых сведений о базовой биологии конъюгативных плазмид IncA/C.