Ковалентный аддукт Trp–His в билирубиноксидазе имеет решающее значение для эффективного связывания билирубина, но играет второстепенную роль в переносе электронов

В отличие от всех изученных до настоящего времени белков, активный центр билирубиноксидазы из Myrothecium verrucaria содержит уникальный тип ковалентной связи между боковыми цепями триптофана и гистидина. Роль этой посттрансляционной модификации в связывании и окислении субстрата изучена недостаточно. Наши структурные и мутационные исследования свидетельствуют о том, что аддукт Trp396-His398 изменяет координацию меди T1 и является важной частью участка связывания и окисления субстрата. Наличие этого аддукта имеет решающее значение для окисления замещённых фенолов и существенно влияет на скорость окисления билирубина. Кроме того, мы впервые представляем структуру билирубиноксидазы в комплексе с одним из её продуктов — ионом феррицианида, взаимодействующим с модифицированной боковой цепью триптофана, Arg356 и петлёй 393–398, формирующей активный центр. Результаты показывают, что структурно и химически различные типы субстратов, включая билирубин, используют аддукт Trp–His преимущественно для связывания и в меньшей степени для переноса электронов.