Быстрая процедура щелочной экстракции для скрининга рекомбинантной плазмидной ДНК

Описана процедура выделения плазмидной ДНК из бактериальных клеток. Метод достаточно прост и позволяет ежедневно анализировать методом гель-электрофореза 100 и более клонов, при этом обеспечивает получение плазмидной ДНК, достаточно чистой для расщепления рестрикционными ферментами. В основе метода лежит селективная щелочная денатурация высокомолекулярной хромосомной ДНК, тогда как ковалентно замкнутая кольцевая ДНК остается двуцепочечной. Необходимый контроль pH достигается без использования pH-метра. После нейтрализации хромосомная ДНК ренатурирует с образованием нерастворимого сгустка, а плазмидная ДНК остается в супернатанте. С помощью этого метода были выделены плазмидные ДНК большого и малого размера.