Требования к одновременному присутствию форболовых эфиров и ионофоров кальция для экспрессии генов, связанных с пролиферацией человеческих T-лимфоцитов

Мы исследовали синергетическое действие форболового эфира и ионофора кальция на пролиферацию человеческих T-лимфоцитов и экспрессию генов, связанных с пролиферацией: c-myc, c-fos, рецептора интерлейкина-2 (IL-2R) и интерлейкина-2 (IL-2). Инкубация T-лимфоцитов одновременно с форболовым эфиром форбол-12,13-дибутиратом (PDB) и ионофором кальция иономицином приводила к экспрессии ряда генов, связанных с пролиферацией, за которой следовала пролиферация T-клеток. Напротив, последовательная стимуляция T-клеток сначала PDB, а затем иономицином не вызывала митогенез, что демонстрирует необходимость одновременного воздействия обоих агентов для пролиферации. Воздействие обоих агентов в течение различных периодов времени вызывало пролиферативный ответ, пропорциональный продолжительности воздействия; для достижения максимальной пролиферации требовалось более 6 ч. В то же время 1 ч воздействия обоих препаратов было достаточно для максимальной экспрессии мРНК протоонкогенов c-fos или c-myc. Экспрессия IL-2R и продукция IL-2 также зависели от продолжительности одновременного воздействия форболового эфира и ионофора кальция. мРНК IL-2 становилась выявляемой через 1 ч и достигала максимума через 3 ч после стимуляции. Индукция мРНК IL-2 происходила только в присутствии обоих агентов и становилась необнаружимой в течение 2 ч после удаления препаратов. Напротив, мРНК IL-2R становилась выявляемой через 1 ч, сохранялась после удаления препаратов и достигала максимума через 24 ч. Количество мРНК IL-2 и IL-2R накапливалось пропорционально продолжительности воздействия. Экзогенный IL-2 усиливал пролиферацию клеток в T-клетках, подвергавшихся воздействию препаратов менее 3 ч. Эти данные показали, что максимальной индукции ядерных протоонкогенов c-myc и c-fos недостаточно для пролиферации T-клеток, индуцированной PDB и иономицином. Уровень накопления мРНК IL-2 и последующая секреция IL-2 являются одним из лимитирующих факторов...