Простая система экспрессии в клетках млекопитающих на основе транспозона piggyBac для индуцируемого получения белков

Представлена система экспрессии на основе транспозона piggyBac для получения стабильно трансфицированных культур клеток млекопитающих с индуцируемой доксициклином экспрессией, предназначенных для крупномасштабного производства белков. Система работает с широко используемыми адгезивными клеточными линиями млекопитающих и линиями, адаптированными к суспензионному культивированию, и требует только одного этапа трансфекции. Кроме того, высокие и однородные уровни экспрессии, наблюдаемые среди клонов, позволяют использовать стабильные массовые клеточные культуры, устраняя трудоемкие этапы клонирования. При непрерывной индукции доксициклином уровни экспрессии белка оставались стабильными в течение как минимум 2 месяцев в отсутствие селекции препаратом. Высокая эффективность системы также позволяет получать стабильные массовые клеточные культуры в формате 96-луночных планшетов, что открывает возможность создания стабильных клеточных культур для целых семейств мембранных или секретируемых белков. Наконец, продемонстрирована применимость системы для крупномасштабного получения, в объеме 140–750 мг, фукозилтрансферазы, локализованной в эндоплазматическом ретикулуме, и двух потенциальных белковых терапевтических средств против рака.