Разработка мультиплексного ПЦР в реальном времени (RT-qPCR) для одновременного обнаружения 18 респираторных вирусов

Острые инфекции дыхательных путей (ARTI) представляют собой серьёзную глобальную проблему здравоохранения с высокой заболеваемостью и смертностью, преимущественно поражая детей младше 5 лет и лиц старше 60 лет. Большинство ARTI вызываются респираторными вирусами, такими как вирус гриппа (IFV), респираторно-синцитиальный вирус (RSV), человеческий риновирус (HRV), человеческий парагриппозный вирус (HPIV), аденовирус человека (HAdV), коронавирус человека (HCoV), бокавирус человека (HBoV) и метапневмовирус человека (HMPV). Точная и чувствительная диагностика респираторных вирусов имеет решающее значение для клинического лечения и ведения пациентов с ARTI. В настоящем исследовании мы разработали мультиплексный RT-qPCR тест для обнаружения 18 распространённых респираторных вирусов. Разработанный тест обладает высокой чувствительностью (предел обнаружения [LOD]: 5–75 копий/25 μL) и хорошей линейной корреляцией между логарифмом числа копий и пороговым циклом (Ct, R²≥0.9944), а также отличной специфичностью, выражающейся в отсутствии перекрёстной реактивности между 18 вирусами и отсутствии неспецифичной амплификации других человеческих патогенов. Тест оценивали на 628 клинических образцах и сравнивали с наборами Sansure и Easy Diagnosis. Результаты показали чувствительность 99.81%, специфичность 100% и общую согласованность 99.84% для шести целевых вирусов (IAV, IBV, RSV, HRV, HAdV и SARS-CoV-2). Также выявлены высокие распространённости IAV, HAdV и HRV в Тайчжоу, провинция Цзянсу, Китай, и высокая вероятность соинфекции HRV с другими респираторными вирусами. Новый мультиплексный RT-qPCR тест представляет собой чувствительный, специфичный и экономически эффективный инструмент для мониторинга 18 распространённых респираторных вирусов с целью снижения распространённости ARTI.