BubR1 блокирует привлечение субстратов к APC/C в зависимости от KEN-бокса

Контрольная точка сборки веретена (SAC) представляет собой сигнальную сеть, задерживающую начало анафазы до тех пор, пока все хромосомы не присоединены к митотическому веретену через свои кинетохоры. Нижестоящей мишенью контрольной точки является комплекс, активирующий анафазу/циклосом (APC/C), лигаза E3 убиквитина, направляющая на протеолиз несколько ингибиторов анафазы, включая секурин и циклин B1. В присутствии непристыкованных кинетохор APC/C ингибируется митотическим контрольным комплексом (MCC), тетрамерным комплексом, состоящим из трёх компонентов SAC — BubR1, Bub3 и Mad2 — и коактиватора APC/C Cdc20. Молекулярные механизмы того, как непристыкованные кинетохоры катализируют образование MCC и как затем MCC ингибирует APC/C, остаются не полностью понятными. В настоящем исследовании с использованием комплементации после РНКи и in vitro-ассайев по убиквитинированию мы изучаем домены BubR1, необходимые для ингибирования APC/C. Мы наблюдаем, что локализация BubR1 на кинетохоре требуется для эффективной сборки MCC и ответа SAC. Кроме того, в отличие от предыдущих работ, мы показываем, что N-концевой домен BubR1 является единственным доменом, участвующим в связывании с Cdc20–Mad2 и с APC/C. В этой области N-концевой KEN-бокс (KEN1) необходим для этих взаимодействий. Напротив, мутация второго KEN-бокса (KEN2) BubR1 не нарушает сборку MCC и связывание с APC/C. Однако как в клетках, так и in vitro KEN2 необходим для ингибирования APC/C, активированного Cdc20 (APC/C(Cdc20)). Мы действительно показываем, что этот второй KEN-бокс усиливает функцию SAC, блокируя привлечение субстратов к APC/C. Таким образом, мы предлагаем модель, в которой KEN-боксы BubR1 выполняют две различные функции: первый способствует сборке MCC, а второй блокирует привлечение субстратов к APC/C(Cdc20).