Сверхэкспрессия секретируемых белков из клеточных линий млекопитающих
Over‐expression of secreted proteins from mammalian cell lines
2014-02-10
SCID: 54.1/7j6282bt
Discuss with AI
экспрессионные векторыслитые меткиклеточные линии млекопитающихсистемы сверхэкспрессии белкасекретируемые белки млекопитающих
Figures from the paper
Abstract (AI)
Для кристаллографических и биофизических исследований функций белков необходима разработка надежных систем сверхэкспрессии секретируемых белков млекопитающих. Из-за сложных дисульфидных связей и специфических паттернов гликозилирования, препятствующих правильному сворачиванию и экспрессии в прокариотических системах экспрессии, многие секретируемые белки необходимо получать в более сложных эукариотических системах экспрессии. В настоящей работе подробно рассматриваются методы получения высоких выходов очищенных секретируемых белков из временно или стабильно трансфицированных клеточных линий млекопитающих. Обсуждаются выбор подходящих экспрессионных векторов, выбор сигнальных последовательностей для секреции белка, доступные слитые метки для повышения стабильности белка и эффективности его очистки, выбор клеточной линии, а также крупномасштабное культивирование клеток в различных форматах.
Key Findings
1
Выбор вектора экспрессии и сигнальной последовательности рассматривается как важный фактор эффективной секреции белка.
2
Слияние с фьюжн-тегами может повышать стабильность секретируемых белков и облегчать их очистку.
3
Секретируемые белки млекопитающих часто требуют эукариотических систем экспрессии, поскольку прокариотические хозяева не могут надёжно воспроизводить их сложные дисульфидные связи и паттерны гликозилирования.
4
Успешное масштабирование производства зависит от выбора подходящей клеточной линии млекопитающих и форматов культивирования клеток.
5
В статье описаны стратегии получения высоких выходов очищенных секретируемых белков из временно или стабильно трансфицированных клеточных линий млекопитающих.
Research Object
секретируемые белки млекопитающих, экспрессируемые в транзиторно или стабильно трансфицированных клеточных линиях млекопитающих
Research Subject
получение высоких выходов очищенных, правильно свернутых секретируемых белков, включая влияние экспрессионных векторов, сигнальных последовательностей, слитых меток, клеточных линий и форматов крупномасштабного культивирования
Publication Details
Publication Date
2014-02-10
Journal
Publisher
ISSN
Open access PDF
Access Type
Author Information
Download PDF
Subscribe to digest