Высокоэффективная экспрессия рекомбинантных белков человека путем транзиентной трансфекции суспензионных клеток HEK293

Получение рекомбинантных белков со сложными посттрансляционными модификациями представляет собой серьезную проблему при изучении их структуры и функций. Быстрое получение и высокий выход продуктов из транзиентно трансфицированных клеточных линий млекопитающих позволяют преодолеть это ограничение и обеспечивают эффективный способ экспрессии белков, которые в естественных условиях направляются по секреторному пути, опосредованному эндоплазматическим ретикулумом (ЭР) и аппаратом Гольджи. Здесь описан протокол экспрессии белков с использованием клеточных линий человека HEK293F и HEK293S, трансфицированных вектором экспрессии для млекопитающих, разработанным для получения высокого выхода белка. Применимость этой системы продемонстрирована на трех репрезентативных гликопротеинах, выход очищенного белка которых составил 95–120 мг на литр культуры. К ним относятся человеческий FcγRIIIa и крысиная α2-6-силилтрансфераза ST6GalI, экспрессируемые в виде N-концевых гибридов с зеленым флуоресцентным белком (GFP), а также немодифицированный Fc-фрагмент человеческого иммуноглобулина G1 (IgG1). Эта надежная система использует бессывороточную среду, адаптируемую для экспрессии изотопно обогащенных белков и углеводов с целью структурных исследований методом масс-спектрометрии и ядерного магнитного резонанса. Кроме того, состав N-гликанов можно регулировать путем добавления небольшой молекулы, предотвращающей определенные модификации гликанов без снижения выхода продукта.