Система РНК-полимеразы/промотора бактериофага T7 для контролируемой эксклюзивной экспрессии специфических генов
A bacteriophage T7 RNA polymerase/promoter system for controlled exclusive expression of specific genes.
1985-02-01
SCID: 54.1/7qupf2bu
Discuss with AI
система РНК-полимеразы/промотора T7белок гена 5 фага T7контролируемая экспрессия геновпромотор λ PLингибирование рифампицином
Figures from the paper
Abstract (AI)
Ген РНК-полимеразы бактериофага T7 был клонирован в плазмиду pBR322 под индуцируемым контролем промотора PL λ-бактериофага. После индукции РНК-полимераза T7 составляла 20% растворимого белка Escherichia coli, что в 200 раз превышало ее уровень в инфицированных T7 клетках. Сверхпродуцируемый фермент был очищен до гомогенного состояния. В процессе экстракции фермент подвергается специфическому протеолизу; эту реакцию можно предотвратить изменением условий лизиса. Специфичность РНК-полимеразы T7 к собственным промоторам в сочетании с возможностью селективного ингибирования РНК-полимеразы хозяина рифампицином обеспечивает эксклюзивную экспрессию генов, находящихся под контролем промотора РНК-полимеразы T7. Мы описываем такую сопряженную систему и ее применение для экспрессии высоких уровней белка гена 5 фага T7, субъединицы ДНК-полимеразы T7.
Key Findings
1
Сочетание специфичности РНК-полимеразы T7 к промоторам T7 с ингибированием клеточной РНК-полимеразы рифампицином обеспечило исключительную экспрессию выбранных генов.
2
Ген РНК-полимеразы T7 был клонирован в плазмиду pBR322 под индуцируемым контролем промотора λ PL.
3
Связанная система обеспечила высокий уровень продукции белка гена 5 фага T7 — субъединицы ДНК-полимеразы T7.
4
Сверхпродуцируемый фермент был очищен до гомогенности, а специфический протеолиз при экстракции предотвращался изменением условий лизиса.
5
После индукции РНК-полимераза T7 составляла 20% растворимого белка Escherichia coli, что в 200 раз превышало уровень в инфицированных T7 клетках.
Research Object
Сопряжённая система экспрессии на основе РНК-полимеразы и промотора бактериофага T7 в Escherichia coli
Research Subject
Контролируемая эксклюзивная и высокоуровневая экспрессия специфических генов, продемонстрированная на примере гена 5 фага T7, за счёт специфичности промотора и избирательного ингибирования РНК-полимеразы хозяина
Publication Details
Publication Date
1985-02-01
Journal
Publisher
ISSN
Open access PDF
Access Type
Author Information
Download PDF
Subscribe to digest