Продукция гетерологичных белков с использованием экспрессионных векторов, содержащих эухроматин, в клетках млекопитающих

При создании стабильной клеточной линии сайт интеграции ДНК вектора в хромосому оказывает существенное влияние на экспрессию трансгена. В настоящей работе в экспрессионных векторах, предназначенных для случайной интеграции, использовали активное генное окружение, а не определённые генетические элементы. Мы создали набор векторов на основе искусственных бактериальных хромосом (BAC), содержащих различные участки открытого хроматина, промоторы и регуляторные элементы генов, и оценили их влияние на экспрессию рекомбинантного белка в клетках яичника китайского хомячка (CHO). Векторный каркас BAC Rosa26 оказался наиболее эффективным: продукция человеческого IgG-Fc как поликлональными, так и клональными клетками увеличилась в девять раз. Клональная продукция белка была прямо пропорциональна числу интегрированных копий вектора и оставалась стабильной в течение 10 недель без давления селекции. Наконец, мы продемонстрировали преимущества векторов на основе BAC, получив два дополнительных белка — гликопротеин ВИЧ-1 CN54gp140 и нейтрализующее антитело PG9 к ВИЧ-1 — в биореакторах и колбах на качалке с выходом продукции 1 г/л.