Белок-шип коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома, экспрессируемый аттенуированным вирусом коровьей оспы, обеспечивает защитную иммунизацию мышей

Белок-шип (S), мембранный компонент коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV), предположительно является важным компонентом вакцин-кандидатов. Мы создали рекомбинантные формы высокоаттенуированного модифицированного вируса коровьей оспы Ankara (MVA), содержащие ген, кодирующий полноразмерный белок S SARS-CoV, с C-концевой эпитопной меткой и без нее; эти формы получили названия MVA/S-HA и MVA/S соответственно. В клетках, инфицированных MVA/S или MVA/S-HA, синтезировался белок массой 200 кДа, который в анализе вестерн-блоттинг распознавался антителами, полученными против синтетического пептида белка S SARS-CoV или эпитопной метки. Дальнейшие исследования показали, что белок S подвергался N-гликозилированию и после обработки пептид-N-гликозидазой F мигрировал в SDS-полиакриламидном геле с кажущейся молекулярной массой около 160 кДа. Приобретение устойчивости к эндогликозидазе H свидетельствовало о транспорте белка S в медиальный компартмент аппарата Гольджи, а конфокальная микроскопия показала, что белок S переносился на поверхность клетки. Интраназальное или внутримышечное введение MVA/S мышам линии BALB/c приводило к образованию сывороточных антител, распознававших белок S SARS-CoV в ИФА и нейтрализовавших SARS-CoV in vitro. Кроме того, введение MVA/S любым из этих способов вызывало защитный иммунитет, что подтверждалось снижением титров SARS-CoV в верхних и нижних дыхательных путях мышей после заражения. Пассивный перенос сыворотки от мышей, иммунизированных MVA/S, на наивных мышей также снижал репликацию SARS-CoV в дыхательных путях после заражения, демонстрируя роль антител к белку S в обеспечении защиты. Аттенуированная природа MVA и способность MVA/S индуцировать нейтрализующие антитела, защищающие мышей, служат основанием для дальнейшей разработки этой вакцины-кандидата.