Грибная аскорбатоксидаза с неожиданной лакказной активностью

Аскорбатоксидазы представляют собой недостаточно изученную группу ферментов. К настоящему времени описаны главным образом растительные аскорбатоксидазы и лишь несколько грибных ферментов. Хотя аскорбатоксидазы относятся к хорошо изученному семейству полимедных оксидаз, их функция остается неясной. В настоящем исследовании была охарактеризована Af_AO1 — фермент гриба Aspergillus flavus. Анализ последовательности и определение содержания меди показали, что Af_AO1 относится к семейству полимедных оксидаз. Биохимическая характеристика и 3D-моделирование выявили сходство как с аскорбатоксидазами, так и с лакказами. Af_AO1 обладала в 10 раз более высоким сродством к аскорбиновой кислоте (K_M = 0,16 ± 0,03 мМ), чем к ABTS (K_M = 1,89 ± 0,12 мМ). Кроме того, наилучшая 3D-модель была построена на основе аскорбатоксидазы из Cucurbita pepo var. melopepo. Однако лакказоподобная активность Af_AO1 в отношении ABTS (V_max = 11,56 ± 0,15 мкМ/мин/мг) была незначительной лишь в относительном смысле и не могла считаться пренебрежимо малой. В то же время другие типичные субстраты лакказ, такие как сирингальдезин и гваякол, Af_AO1 не окисляла. На основании биохимической и структурной характеристики Af_AO1 была классифицирована как аскорбатоксидаза с необычной лакказоподобной активностью.