Высокопродуктивная система транзиентной экспрессии в клетках CHO: коэкспрессия генов, кодирующих EBNA-1 и GS, повышает транзиентную экспрессию белка

Эффективная система быстрой экспрессии белков имеет решающее значение для поддержки ранних этапов разработки лекарственных препаратов. Транзиентная экспрессия генов является эффективным подходом; чтобы обеспечить использование тех же клеток-хозяев для последующей разработки стабильной клеточной линии, мы создали высокопродуктивную систему транзиентной экспрессии в клетках китайского хомячка (CHO). Адаптированные к суспензионному культивированию клетки-хозяева CHO-K1 были генетически модифицированы для экспрессии гена, кодирующего ядерный антиген 1 вируса Эпштейна—Барр (EBV) (EBNA-1), с коэкспрессией или без коэкспрессии гена глутаминсинтетазы (GS). Анализ трансфектантов показал, что коэкспрессия EBNA-1 и GS повышала транзиентную экспрессию рекомбинантного антитела с плазмиды, содержащей элемент ДНК OriP, по сравнению с трансфектантами, экспрессирующими только EBNA-1. Это было подтверждено путем повторной трансфекции клеточной линии, экспрессирующей только EBNA-1, геном GS. В повторно трансфицированных клеточных линиях наблюдалось увеличение транзиентной экспрессии по сравнению с родительской клеточной линией, экспрессирующей только EBNA-1. Процесс транзиентной экспрессии для наиболее продуктивной транзиентной клеточной линии CHO был дополнительно разработан для повышения экспрессии белка и масштабируемости путем оптимизации условий трансфекции и процесса культивирования клеток. В результате была создана масштабируемая система транзиентной экспрессии в клетках CHO, способная обеспечивать экспрессию рекомбинантных белков, например антител, на уровне 2 г/л. Эта система позволяет быстро получать граммовые количества рекомбинантного антитела для доклинических исследований; качество продукта сопоставимо с качеством антитела, полученного из стабильно трансфицированной клеточной линии CHO.