ПЦР в реальном времени в вирусологии

Применение полимеразной цепной реакции (ПЦР) в молекулярной диагностике достигло такого уровня, что в настоящее время этот метод признан золотым стандартом выявления нуклеиновых кислот различного происхождения и стал незаменимым инструментом исследовательской лаборатории. ПЦР в реальном времени получила более широкое признание благодаря повышенным быстроте, чувствительности и воспроизводимости, а также снижению риска контаминации продуктами предыдущих реакций. В настоящее время для выявления продуктов ПЦР при проведении ПЦР в реальном времени используются пять основных типов химии: флуорофоры, связывающиеся с ДНК, 5′-эндонуклеаза, соседние линейные и шпилечные олигонуклеотидные зонды, а также ампликоны, обладающие собственной флуоресценцией; все они подробно описаны. Мы также рассматриваем факторы, ограничивающие развитие мультиплексной ПЦР в реальном времени, и роль ПЦР в реальном времени в количественном определении нуклеиновых кислот. Аппаратное обеспечение для амплификации и флуорогенные системы детекции быстро развивались по мере углубления понимания ПЦР в реальном времени; данный обзор призван ознакомить специалистов с современным состоянием этой области. Мы описываем предпосылки, преимущества и ограничения ПЦР в реальном времени и анализируем литературу, посвящённую выявлению вирусов в условиях рутинной и исследовательской лаборатории, чтобы сосредоточиться на одной из многочисленных областей, в которых применение ПЦР в реальном времени обеспечило значительные методические преимущества и улучшило результаты лечения пациентов. Однако описанная технология применяется также в других областях микробиологии, а также при изучении экспрессии генов и генетических заболеваний.