Стандартизация данных методов количественной ПЦР в реальном времени: оценка выбросов и сравнение калибровочных кривых

ВВЕДЕНИЕ: Поскольку количественная ПЦР в реальном времени (RT-QPCR) всё чаще используется для обеспечения соблюдения законодательства и нормативных требований, основанных на выявлении следовых количеств ДНК, повышается внимание к вопросам качества, связанным с этим методом. В недавних исследованиях основное внимание уделялось выявлению факторов, вносящих существенный вклад в неопределённость измерений при проведении количественной ПЦР в реальном времени, посредством изучения экспериментального дизайна и рабочих процедур. Однако вклад этапа анализа данных в неопределённость измерений подробно не исследовался. В статье представлены два дополнительных подхода к стандартизации анализа данных, основанных на новом применении статистических методов к RT-QPCR, с целью минимизации потенциальной неопределённости результатов. РЕЗУЛЬТАТЫ: Для разработки двух аспектов обработки и анализа данных, способных влиять на неопределённость результатов измерений, были получены экспериментальные данные. В статье описаны предварительные аспекты стандартизации данных посредством применения статистических методов к RT-QPCR. Первый аспект касается статистической идентификации и последующей обработки выбросов, возникающих при проведении RT-QPCR, а также применения рекомендаций ISO к принятию или отклонению выбросов. Второй аспект связан с разработкой объективного статистического теста для сравнения калибровочных кривых. ЗАКЛЮЧЕНИЕ: Предварительные статистические тесты для выявления выбросов и сравнения калибровочных кривых могут применяться с использованием базовых функций стандартного программного обеспечения для работы с электронными таблицами. Эти два аспекта подчёркивают, что сопоставимость результатов, получаемых с помощью RT-QPCR, требует дальнейшего совершенствования и развития на этапе обработки данных. Внедрение стандартизированных подходов к анализу данных должно способствовать дальнейшему снижению вариабельности, обусловленной субъективными суждениями. Описанные в статье аспекты будут способствовать...